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使用前仪器要调零、调百校准,参比溶液又称空白溶液。测量时用作比较的、不含被测物质但其基体尽可能与试样溶液相似的溶液。通常,用参比溶液扫描的曲线应是一条平坦的直线。有时,基体中虽不含被测物质,但含有别的物质,这时必须保证其不影响测试。经常碰到的是试剂空白中含有被测物质,此时必须经过纯化将其除去。否则将影响测定结果。在色谱分析中,有时基体中可能存在一个以上的和被测组分相距较远的色谱峰,计算机在数据处理中不会计入它们,不影响测定。
以所含铁离子是多少为例:
参比溶液与测量溶液就相差铁离子含量,在测量之前要用不含铁离子的参比溶液扫描,调整仪器后(调100的过程),然后再测量含铁离子溶液的比色皿,这样测量溶液中的铁离子会形成自己特定的峰值,次峰值与数据库里基准峰值对比就可以得出溶液所含量了。如果数据库中没有铁离子的曲线,你还要自己先用不同铁离子浓度的溶液做工作曲线,然后进行测量。
分光光度计是怎么使用的?
分类: 医疗健康
问题描述:
我以未接触过这种仪器,请大家帮助我一下.怎样使用它
解析:
(1)721-分光光度计
1.接通电源,打开仪器开关,掀开样品室暗箱盖,预热10分钟。
2.将灵敏度开关调至“1”档(若零点调节器调不到“0”时,需选用较高档。)
3.根据所需波长转动波长选择钮。
4.将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处,用擦镜纸擦清外壁,放入样品室内,使空白管对准光路。
5.在暗箱盖开启状态下调节零点调节器,使读数盘指针指向T=0处。
6.盖上暗箱盖,调节“100”调节器,使空白管的T=100,指针稳定后逐步拉出样品滑竿,分别读出测定管的光密度值,并记录。
7.比色完毕,关上电源,取出比色皿洗净,样品室用软布或软纸擦净。
原理:(一)郎伯-比尔定律
光是一种电磁波,具有一定的波长和频率。可见光的波长范围在400~760nm,紫外光为200~400nm,红外光为760~500000nm。可见光因波长不同呈现不同颜色,这些波长在一定范围内呈现不同颜色的光称单色光。太阳或钨丝等发出的白光是复合光,是各种单色光的混合光。利用棱镜可将白光分成按波长顺序排列的各种单色光,即红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等,这就是光谱。有色物质溶液可选择性地吸收一部分可见光的能量而呈现不同颜色,而某些无色物质能特征性地选择紫外光或红外光的能量。物质吸收由光源发出的某些波长的光可形成吸收光谱,由于物质的分子结构不同,对光的吸收能力不同,因此每种物质都有特定的吸收光谱,而且在一定条件下其吸收程度与该物质的浓度成正比,分光光度法就是利用物质的这种吸收特征对不同物质进行定性或定量分析的方法。
在比色分析中,有色物质溶液颜色的深度决定于入射光的强度、有色物质溶液的浓度及液层的厚度。当一束单色光照射溶液时,入射光强度愈强,溶液浓度愈大,液层厚度愈厚,溶液对光的吸收愈多,它们之间的关系,符合物质对光吸收的定量定律,即Lambert-Bear 定律。这就是分光光度法用于物质定量分析的理论依据。
分光光度计使用方法:?
(1)仪器预热。打开样品室盖(光门自动关闭)。开启电源,指示灯亮,仪器预热20 min。选择开关置于“T”旋钮,使数字显示为“00.0”。
(2)旋动波长手轮,把所需波长对准刻度线。?
(3)将装有溶液的比色皿放置比色架中,令参比溶液置于光路。?
(4)盖上样品室盖,调节透光率“100%T”旋钮,使数字显示为“100.0T”。(如显示不到100%T,则可加按一次。?
(5)吸光度A的测量:仪器调T为0和100%后,将选择开关转换至A调零旋钮,数字显示应为“.000”。然后拉出拉杆,使被测溶液置入光路,数字显示值即为试样的吸光度A。
(6)测定完毕后,先打开样品室盖,再断电源。比色杯应清洗干净后,再贮放保存。?
(7)浓度直读 按MODE键,使CONC批示灯亮,交已标定浓度的溶液 移入光路,按下溶液调节键(↑100%T键的↓0%键),使数字显示为标定值,将被测溶液移入光路,即读出相应浓度值。
(8)仪器数字显示背后,装有接线柱,按下FUNC键,可输出模拟信号
分光光度计,又称光谱仪(spectrometer),是将成分复杂的光,分解为光谱线的科学仪器。测量范围一般包括波长范围为380~780 nm的可见光区和波长范围为200~380 nm的紫外光区。不同的光源都有其特有的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。
钨灯的发射光谱:钨灯光源所发出的380~780nm波长的光谱光通过三棱镜折射后,可得到由红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫组成的连续色谱;该色谱可作为可见光分光光度计的光源。
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我是周丽号的签约作者“静轩”
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